Relever les défis de la production de vecteurs lentiviraux
Les vecteurs lentiviraux sont des outils d’administration de gènes polyvalents, capables de transduire une large gamme de types cellulaires. Cependant, produire de grands volumes de lentivirus de haute qualité peut présenter plusieurs défis. La société mondiale de biotechnologie GenScript a récemment lancé son service d’emballage de vecteurs lentiviraux de recherche, qui exploite la plate-forme de production lentivirale exclusive de l’entreprise pour assurer une production cohérente de virus intacts et fonctionnels.
Pour en savoir plus sur le service et sur la manière dont il résout certaines des difficultés associées à la production de lentiviraux, Réseaux technologiques a parlé à Koh Meng Yong, PhD de GenScript. Dans cette interview, le Dr Meng Yong discute également des avantages de l’utilisation de vecteurs lentiviraux et de certaines des applications qu’ils permettent.
Anna MacDonald (AM) : Pouvez-vous expliquer ce qu’est un lentivirus et mettre en évidence certaines de leurs applications ?
Koh Meng Yong (KMY) : Les lentivirus sont des virus à ARN ayant généralement un diamètre de 80 à 120 nm et sont caractérisés par une longue période d’incubation dans les cellules hôtes infectées avant la manifestation de la maladie. Les lentivirus appartiennent à la famille des rétrovirus ayant la capacité d’intégrer leur génome viral dans des cellules hôtes infectées. Pour les rendre sûrs pour la recherche, les scientifiques ont généré des lentivirus recombinants qui conservent la capacité de s’intégrer dans le génome de l’hôte sans provoquer de maladie. Cela en fait des vecteurs idéaux dans les applications d’ingénierie cellulaire où l’intention est de créer une cellule modifiée qui exprime de manière stable ou manque un gène spécifique.
AM : Comment les lentivirus sont-ils utilisés pour aider les efforts de découverte de médicaments COVID-19 ?
KMY : Les lentivirus sont utilisés pour introduire des protéines virales individuelles dans des cellules humaines afin de comprendre comment elles interagissent avec la protéine humaine. En étudiant ces interactions, on espère que les chercheurs pourront identifier les médicaments existants qui peuvent perturber ces interactions et potentiellement être utilisés comme traitement de la maladie chez les patients infectés par le virus.
AM : Quels sont les principaux avantages de l’utilisation de vecteurs lentiviraux par rapport aux autres vecteurs viraux ?
KMY : Les lentivirus agissent en infectant d’abord une cellule et en libérant leur matériel d’ARN dans le cytoplasme de la cellule hôte. Là, l’ARN est converti en ADN et s’intègre finalement dans le génome de la cellule hôte, provoquant une modification génétique à long terme de la cellule hôte. Cela les rend très efficaces dans l’ingénierie permanente d’une cellule, permettant une expression stable du génome viral. Deuxièmement, la quantité de génome viral transportée est importante, ce qui en fait un véhicule souhaitable pour la délivrance de grands transgènes dans les cellules. La protéine d’enveloppe peut être encore modifiée pour permettre aux virus d’infecter une large gamme de types de tissus et les lentivirus possèdent la capacité d’infecter des cellules en division et non en division. Enfin, ils ont une faible capacité immunogène, garantissant que le système immunitaire de la cellule hôte ne développe pas de réponse immunitaire au virus.
AM : Comment sont produits les vecteurs lentiviraux ? Quels sont les principaux défis de ce processus?
KMY : Tout d’abord, vous prenez vos plasmides d’emballage qui codent pour la particule virale et votre vecteur plasmidique portant le transgène à emballer dans le virus et les co-transfectez dans une lignée cellulaire d’encapsidation cultivée dans un milieu de culture. Quelques jours après la co-transfection, les particules virales libérées dans le milieu de culture peuvent être récoltées et soumises à un traitement en aval tel que la purification et la concentration. De nombreuses variables affectent la quantité et la qualité des préparations virales au cours du processus de préparation. Ceux-ci incluent l’efficacité de transfection des lignées cellulaires d’encapsidation, la capacité de production de la lignée cellulaire et la purification et la concentration des particules virales.
UN M: Pouvez-vous nous en dire plus sur le service Research Lentiviral Vector Packaging Service de GenScript et sur la manière dont il relève ces défis ?
KMY : Chez GenScript, nous avons développé un protocole de production unique optimisé pour produire un virus hautement purifié avec un rendement maximal. Ces conditions optimales s’appliquent à chaque étape du protocole de production de virus et comprennent : Un protocole de transfection optimisé pour une évolutivité et un rendement viral élevés et un système sans sérum qui produit des lentivirus sans facteurs de croissance animaux. Ceci est particulièrement important lorsque l’on travaille avec des cellules primaires qui peuvent être plus sensibles à ces contaminations par les facteurs de croissance. Nous avons également un protocole de purification et de concentration de virus minutieux et approfondi qui garantit que les particules virales restent intactes et fonctionnelles. De plus, nous disposons de plusieurs méthodes de mesure du titre et de contrôle qualité pour garantir que les préparations virales sont exemptes de mycoplasmes ou de contamination bactérienne. Tout cela se traduit par des préparations virales de meilleure qualité, intactes et fonctionnelles qui contribuent au succès du prochain projet d’ingénierie cellulaire de nos clients.
Koh Meng Yong s’adressait à Anna MacDonald, rédactrice scientifique pour Technology Networks. Dr Meng Yong est chef de produit mondial, Assay Cell Lines et Lentivirus Packaging Services pour GenScript.